將既有基因檢測方法應用在小片段的基因突變檢測時，時常有難以精準定量的問題，影響後續的療效分析與追蹤。嘉義長庚醫院陳志丞開發出具有高敏感度的qCAST Duplex PCR檢測技術，對於僅有一顆核苷酸長度的基因突變，也能得到0.1%的高敏感度檢測結果...

由於骨髓增生性腫瘤（Myeloproliferative Neoplasm, MPN）的患者中約八成帶有JAK2 V617F基因突變，所以臨床醫師經常使用可減少突變細胞的新藥進行治療。然而，這個突變基因的長度只有一個核苷酸，要準確定量JAK2 V617F的突變狀況也特別困難。

嘉義長庚醫院血液腫瘤科主治醫師陳志丞表示，傳統的定性檢測有其限制，包含跨機構檢測缺乏準確性、沒有適當標準品造成的數據變動，或搭配機台限制的試劑所造成的不便，造成臨床對於用藥效果分析、疾病追蹤上的不便。

現行技術難以對極小片段的基因突變進行定量檢測

為了精準定量檢測JAK2 V617F，陳志丞升級現有的雙重PCR（Duplex PCR）技術，開發出一個高靈敏度的單點基因突變率檢測平台：qCAST Duplex PCR。他解釋，現有檢測方法的缺點是沒有定量的對照基因，引子（primer）也常常找錯應放大的基因片段，影響專一性。

為了解決這些問題，陳志丞設計的檢測平台內容在雙重PCR外，又加入了2項改良：1. 人工標準品設計：利用人工合成序列質體作為標準品，分別含有目標基因野生型（Wild Type）與突變型等長區段，建立標準曲線並縮小拷貝數變異造成的誤差；2. 野生型PCR阻斷法：在野生型引子末端以3’- dideoxy修飾，抑制突變型引子之非專一放大，提升敏感度達到0.1%。

與現有技術比較，這個平台的優勢除了敏感度顯著改良，而且還不受檢測機台、操作員的限制，具有開發成IVD試劑的潛力。更重要的是，陳志丞補充，該檢測法的結果有機會成為微小疾病殘留的檢測指標（Minimal Residual Disease, MRD），參與疾病用藥後的追蹤與控管。

陳志丞解釋，臨床醫師制定用藥決策時，必須精準掌握患者的恢復情形，若使用過去的檢測技術，JAK2 V617F的突變率一旦低於10%就難以掌握；但在臨床試驗中，陳志丞以qCAST Duplex PCR技術追蹤MPN患者使用Ropeg藥物連續一年的情況，觀察到隨著用藥時間拉長，JAK2 V617F的突變率從80%逐漸降到2%。他強調，這樣的變化軌跡，就是治療MPN的重要參考。

※qCAST Duplex PCR技術可以將MPN患者的基因突變率精準檢測到2%左右（來源：生策中心）。

2022年嘉義長庚開始提供JAK2 V617F檢測服務

技術開發完成後，2022年時嘉義長庚醫院利用這項檢測技術，成立了台灣第一個MPN治療中心，提供高精準度的JAK2 V617F定量檢測服務。陳志丞解釋，這項服務的目標對象是全台灣正在收受MPN患者的醫師，只要提供患者檢體，嘉義長庚就能進行定量檢測。

陳志丞估計，2023年至今已有10多家醫院的專科醫師使用這項服務，共進行了50多件的檢測，其中也不乏大型醫院的醫師，顯示這項檢測技術的水準在台灣逐漸受到認可。

同時間內，陳志丞也想把qCAST Duplex PCR技術進一步商業化。他透露，目前共有兩家製造MPN治療藥物的藥廠有興趣合作，想將這項檢測技術與MPN藥物結合，發展更全面的治療方案，預計在2024年時可以完成技術移轉。

陳志丞下一步也希望發揮qCAST Duplex PCR的高敏感度優勢，開發更多的檢測應用。他表示，從MPN的經驗證明，對極小基因片段發生突變的檢測能力，正是這項技術的核心。未來，他也希望能與其他科別的醫師合作，開發實體腫瘤在內的其他癌症檢測方案。

※嘉義長庚陳志丞醫師獲得第18屆國家新創獎「臨床新創 - 生醫產品研發」肯定（來源：生策中心）。